STTT：LIX1樣蛋白通過驅動肝星狀細胞活化，促進肝纖維化

肝星狀細胞(HSC)在纖維化反應中發揮關鍵作用，因此滅活活化的HSC可能是一種潛在的纖維化治療方法。由 HSC 和巨噬細胞表達的 CCL20 可作為炎癥和纖維化的介質。LIX1L 是一種推定的 RNA 結合蛋白 (RBP)，可能在轉錄后基因調控中起重要作用。然而，LIX1L在肝纖維化中的生物學功能尚不清楚，因此作者旨在研究其在HSC激活和肝纖維化中的功能。

圖片來源：https://doi.org/10.1038/s41392-021-00665-6

LIX1L在人肝硬化(GSE25097)、腫瘤組織和纖維化肝患者中表達顯著上調，并與肝硬化肝纖維化分期、炎癥水平和α-SMA表達呈正相關。同樣，LIX1L在CCl4或BDL誘導的小鼠肝纖維化模型中表達明顯增加。

該實驗首先生成 Lix1l 敲除 (Lix1l / ) 小鼠，然后對其進行 CCl4 和 BDL 處理。H&E染色、Masson三色染色、Sirius紅染色及生化膠原定量結果顯示Lix1l /小鼠的膠原沉積減少，假小葉結節形成。與WT小鼠相比，Lix1l /小鼠血清ALT、AST、促炎基因和α-SMA蛋白表達顯著降低。

HSC和KC的活化在肝纖維化過程中起重要作用。通過α-SMA和F4/80表達表明，Lix1l /小鼠的HSC和肝巨噬細胞浸潤的纖維化活性降低。為了確定LIX1L的細胞分布，作者檢測了LIX1L在培養的原代造血干細胞、KCs和肝細胞中的表達。從健康、CCl4和BDL處理小鼠中分離的原代細胞顯示LIX1L在造血干細胞和KCs中比在肝細胞中更豐富。肝組織雙重免疫熒光染色顯示LIX1L與α- sma陽性的造血干細胞和f4 /80陽性的巨噬細胞共定位。為了證實這些結果，作者使用腺相關病毒(AAV)-LIX1L-Flag在LIX1L敲除小鼠的肝細胞中表達LIX1L。

值得注意的是，LIX1L在肝細胞中過表達未能逆轉LIX1L敲除對纖維化的有益作用，表明LIX1L在HSC和KCs中主要調節肝纖維化。

肝星狀細胞活化是肝纖維化發展的關鍵事件。作者檢測了LIX1L的增加是否調節HSC的激活，發現在培養激活過程中，隨著α-SMA的誘導，原代HSC中LIX1L水平逐漸升高。LIX1L缺失抑制了原代造血干細胞和LX-2細胞中纖維化標志物的表達，抑制了CCl4刺激小鼠中HSC的激活，而LIX1L過表達進一步增強了LX-2細胞中α-SMA和纖維化標志物的表達?？傊?，這些結果表明LIX1L促進肝纖維化，參與調節HSC激活。

為了確定LIX1L誘導HSC激活的機制，作者比較了對照和LIX1L敲低LX-2細胞的基因表達譜。結果表明，LIX1L 敲低降低了已知在 HSC 活化和肝纖維化中起關鍵作用的多種基因的表達。KEGG通路分析顯示，LIX1L基因下調抑制的基因在趨化因子信號通路中富集最多。同時，CCL20和CCL2的表達明顯減少，其中CCL20的表達減少最多。在 LIX1L 缺陷型 HSCs 和 KCs 以及從 BDL 處理的小鼠中分離的培養的原代 HSCs 和 KCs 的上清液中，通過 Elisa 測定法測定的 Ccl20 mRNA 和 CCL20 表達顯著降低。

免疫組化分析顯示，CCL20染色主要發生在非實質細胞中，而CCl4或BDL處理Lix1l /小鼠中CCL20染色減少。此外，CCL20敲低顯著降低了LX2細胞纖維化基因的表達。CCL20可激活HSC，逆轉LIX1L缺失對HSC激活的抑制作用。此外，外源CCL20可上調HSCs和KCs中Lix1l的表達。與 WT KCs 相比，Lix1l/KCs 中的內源性 CCL20 表達降低。因此，為了確定內源性CCL20是否影響LIX1L的表達，作者檢測了LIX1L / KCs和WT KCs共培養的原代造血干細胞中LIX1L的表達。發現內源性CCL20可以上調LIX1L的表達。這些數據進一步表明LIX1L通過調控CCL20信號通路促進HSC的活化。

LIX1L通過調節CCL20表達促進肝纖維化的示意圖

圖片來源：https://doi.org/10.1038/s41392-021-00665-6

該研究證實LIX1L是一種通過激活造血干細胞介導慢性肝損傷過程中肝纖維化的新型調控因子。LIX1L與CCL20 mRNA的相互作用是連接CCL20- ccr6軸、KCs-HSCs通訊以及HSCs激活的關鍵分子事件。因此，LIX1L抑制可能是一種有前景的預防肝纖維化的策略。（生物谷 Bioon.com）

參考文獻

Xiaoyun Zhu et al. LIX1-like protein drives hepatic stellate cell activation to promote liver fibrosis by regulation of chemokine mRNA stability. Signal Transduct Target Ther 2021 Sep 1;6(1):319. doi: 10.1038/s41392-021-00665-6.