Molecular Therapy Nucleic Acids: MiR-17通過負性調節miR-17-92簇發揮腫瘤抑制作用

甲狀腺間變性癌(ATC)是一種侵襲性、高轉移性的癌癥，表達高水平的microRNA(MiR)17-92簇。作者利用miR抑制系統，基于ATC SW579細胞系中種子序列的同源性，研究了miR-17-92簇內不同miR的功能。雖然四個miR-17-92家族中有三個是致癌的，但作者發現了miR-17在體內外作為腫瘤抑制因子的新作用。

圖片來源: https://doi.org/10.1016/j.omtn.2021.10.021.

人類13號染色體上的miR-17-92簇：miR17HG被表達為單個轉錄本，然后被加工成六個成熟的microRNA(miR-17、miR-18a、miR-19a、miR-20a、miR-19b和miR-92)。miR-17和miR-20a具有相同的種子區序列，如domir-19a和miR-19b，而miR-18a和miR-92a。 PMIS系統可用于通過種子序列識別來特異性地抑制靶miR功能。

為了抑制miR-17-92簇中不同的miR，設計了不同的PMIs結構來靶向miR-17、miR18a、miR-19a和miR-92a-1的種子區，并用表達GFP的PMIs慢病毒構建體感染SW579，建立了穩定的細胞系。作為對照，作者用表達pMIs空載體的SW579細胞系作為對照，該空載體不抑制miR功能。

通過將miR-17-92成員的結合位點克隆到psiCHECK-2熒光素酶報告基因的30UTR上，構建了熒光素酶報告基因，用來檢測miR-17-92成員的活性。SW579細胞內源性高表達miR-17-92簇和單個家族成員。在表達非特異性pMIS載體的SW579細胞中，與缺少miR-17結合位點的報告相比，添加miR-17結合位點的報告導致歸一化信號減少90%。

在確認每個穩定細胞系的miR抑制后，將每個細胞系的形態與表達非特異性PMIS載體的SW579細胞進行比較。作為生長對照，SW579、SW579-PMIS-載體和SW579-PMIS-miR-17細胞在生長12h后出現。表達pMIS載體pMIS-miR-18a、pMIS-miR-19a、n dPMIS-miR-92a-1的細胞在培養96h后細胞形態保持不變。

為了確定抑制miR-17的作用是否針對SW579細胞，我們還建立了穩定表達pMIS載體pMIS-miR-17的MDA-T32甲狀腺乳頭狀癌細胞系。增殖實驗表明，抑制miR-17對MDAT32細胞的增殖也有促進作用，而穩定表達pMIS-載體的細胞與親本細胞的增殖沒有差異。

作者對顯示抑制miR-17促進腫瘤生長的活體結果感到驚訝。已有研究表明miR-17高表達可引起腫瘤，并已被用作腫瘤的生物標志物。然而，也有研究表明其他miR-17-92家族成員與腫瘤進展有關。為了確定miR-17-92簇中的其他miR是否因miR-17的抑制而增加，設計了引物來探測pri-miR-17-92簇轉錄本的不同區域。

有趣的是，在表達PMIS-miR-17的SW579細胞中，每個用于測量其表達的引物組檢測到更多的pri-miR-17-92簇，這表明miR-17調節pri-miR-17-92簇的轉錄。此外，抑制miR-17的活性會導致成熟miR-18a、miR-19a和Asmir-92a的表達增加。

MiR-17作為變阻器調節ATC細胞中miR17-92簇的表達

圖片來源: https://doi.org/10.1016/j.omtn.2021.10.021

這些數據表明，miR-17在ATC中的作用不同于miR-17-92簇所代表的其他家族。這一發現不同于前一個小組的結果，該小組顯示miR-17在ATC13中是致癌的；該小組使用了不同的ARO細胞系，SW579細胞可能受不同的基因調控網絡控制。然而，他們也沒有使用穩定表達PMIS-miR-17抑制劑的細胞，這種抑制劑允許解剖miR功能。

類似地，作者還證明了抑制MDA-T32細胞中miR-17會導致細胞增殖增加。有趣的是，這些細胞表達高水平的內源性miR-17，我們發現miR-17針對CCND2，抑制細胞增殖。質粒DNA在SW579細胞中過表達miR-17對CCND2轉錄水平有顯著影響，但影響不大。此外，在內源性miR-17高表達的背景下，miR-17的過度表達對細胞形態和增殖影響不大。然而，作者發現在ATC細胞中miR-17的上調并不與致癌功能的增強相關。(生物谷 Bioon.com)

參考文獻

Yan Sweat et al. miR-17acts as a tumor suppressor by negatively regulating the miR-17-92 cluster. Mol Ther Nucleic Acids. 2021 Oct 21; 26: 1148-1158. doi: 10.1016/j.omtn.2021.10.021.